數(shù)字PCR儀是一種核酸分子一致定量技術(shù)。目前有三種方法用于核酸分子的定量，普通PCR半定量通過灰度進(jìn)行定量；熒光定量PCR通過Ct(Cq)值進(jìn)行相對定量；數(shù)字PCR是較新的定量技術(shù)，基于單分子PCR方法來進(jìn)行計(jì)數(shù)的核酸定量，是一種一致定量的方法。主要采用微滴化方法，將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個核酸分子模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號，沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號。根據(jù)數(shù)字PCR 反應(yīng)單元總數(shù)和有熒光信號的單元數(shù)以及樣品的稀釋倍系數(shù)，就可以得到樣本的最初拷貝數(shù)(濃度)。

　　注意：

　　1. Sock時，溫度應(yīng)設(shè)為10℃，時間不要超過30分鐘。溫度過高，時間過長，易導(dǎo)致儀器的損壞。

　　2. 操作時，要嚴(yán)格遵守以上原則，及時記錄儀器運(yùn)行的情況。

　　保養(yǎng)：

　　1．樣品池的清洗

　　先打開蓋子，然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min，然后清洗被污染的孔；用微量移液器吸取液體，用棉簽吸干剩余液體；打開PCR儀，設(shè)定保持溫度為50℃的PCR程序并使之運(yùn)行，讓殘余液體揮發(fā)去除。一般5～10min即可。

　　2．熱蓋的清洗

　　對于數(shù)字PCR儀，當(dāng)有污染出現(xiàn)，而且這一污染并非來自樣品池時；或當(dāng)有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時，需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面，確保樣品池的孔鏡干凈，無污物阻擋光路。

　　3．儀器外表面的清洗

　　清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂，但達(dá)不到消毒的效果。選擇沒有腐蝕性的清洗劑對PCR儀的外表面進(jìn)行清洗。

　　4．更換保險絲

　　先將PCR儀關(guān)機(jī)，拔去插頭，打開電源插口旁邊的保險盒，換上備用的保險絲，觀察是否恢復(fù)正常。

　　維修：

　　1.PCR儀器需要定期檢測，視制冷方式而定一般半年至少一次。

　　2.PCR反應(yīng)的要求溫度與實(shí)際分布的反應(yīng)溫度是不一致的，當(dāng)檢測發(fā)現(xiàn)各孔平均溫度差偏離設(shè)置溫度大于1～2℃時，可以運(yùn)用溫度修正法糾正PCR實(shí)際反應(yīng)溫度差。

　　3．PCR反應(yīng)過程的關(guān)鍵是升、降溫過程的時間控制，要求越短越好，當(dāng)PCR儀的降溫過程超過60s，就應(yīng)該檢查儀器的制冷系統(tǒng)，對風(fēng)冷制冷的PCR儀要較*地清理反應(yīng)底座的灰塵；對其他制冷系統(tǒng)應(yīng)檢查相關(guān)的制冷部件。

　　4．一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時，不要輕易打開或調(diào)整數(shù)字PCR儀的電子控制部件，必要時要請專業(yè)人員修理或利用儀器電子線路詳細(xì)圖紙進(jìn)行維修。